Библиотека Статьи Отдел ветеринарии Гистоструктура слепых кишок бройлеров в норме и при экспериментальном эшерихиозе

Птицеводство. - 2015. - № 3. - С. 25-29.

УДК 636.5:619

ГИСТОСТРУКТУРА СЛЕПЫХ КИШОК БРОЙЛЕРОВ В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЭШЕРИХИОЗЕ

В.А. Шестаков, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела ветеринарии, ФГБНУ СибНИИП

Аннотация. В статье приводится гистоструктура стенки слепых кишок цыплят-бройлеров в норме и при экспериментальном заражении E.coli. Установлено, что у птицы, погибшей после заражения, реактивные центры в фолликулах слизистой оболочки не активируются, развивается катаральный тифлит. А у выживших обнаружена пролиферация лимфоидной ткани с выраженными реактивными центрами в фолликулах.

Ключевые слова: цыплята-бройлеры, слепая кишка, лимфатические фолликулы, эшерихиоз, катаральное воспаление.

В специальной литературе патологические изменения в органах птицы при инфекционных болезнях часто ограничиваются описанием внешних признаков, без информации о реакции тканей. При этом гистоструктурная характеристика упускается из-за недостатка сведений об их изменениях. Некоторые авторы, характеризуя состояние органов, не называют развивающуюся патологию. Имеет место несоответствие морфологической номенклатуре, например: «...эпителиальный слой слизистой оболочки толстого и слепого отдела кишечника...», непонятные сведения «... в просвете ворсинок...». При этом внимание уделяется только тимусу, бурсе Фабрициуса и селезёнке без учёта возраста птицы и факта провизорности – физиологической (возрастной) атрофии данных органов. Из-за недостаточной изученности нормальной гистологической структуры кишечника бройлеров упускается характеристика лимфоидной ткани и фолликулов, имеющихся в слизистой оболочке кишечника птицы.

По данным ФГУ ЦНМВЛ, в Российской Федерации среди бактериальных болезней 60 % приходится на колибактериоз. Многие из этих заболеваний имеют сходное клиническое проявление и протекают в ассоциации, что затрудняет постановку клинического и патолого-анатомического диагноза. К настоящему времени свойства некоторых возбудителей изменились, а в этиологии болезней возросла роль условно патогенной микрофлоры, что усложняет диагностику бактериологическим методом. Применение антибиотиков делает невозможным и/или искажает результаты бактериологического исследования. При постановке диагноза бактериологическим методом работа ведётся с живыми патогенными штаммами возбудителей, поэтому материал должен доставляться в лабораторию не позднее четырёх часов после гибели птицы, но это условие трудно осуществимо даже в пределах одного региона. Для гистологической диагностики важен не возбудитель, а структурные изменения в тканях («следы»), оставленные им.

Целью нашего исследования является изучение гистологической структуры стенки слепых кишок цыплят-бройлеров в норме и определение в них патологических изменений при эшерихиозе для возможности диагностики гистологическим методом.

Материалы и методы. Исследования проведены в отделе ветеринарии ФГБНУ СибНИИП в рамках научных опытов с экспериментальным заражением птицы. Для эксперимента использованы:

14-дневные цыплята кросса «Сибиряк 2С» – 70 голов, из которых 60 в возрасте 21-го дня были заражены патогенной культурой E.coli. Диагностический убой проведён в 35-дневном возрасте;

21-дневные цыплята кросса «Иза Хаббард» – 150 цыплят (заражались все), убой также в 35 дней.

В этих двух опытах заражение проводили внутрибрюшинно патогенной культурой E.coli, взвесью односуточных агаровых культур в дозе 0,5×109 микробных тел по ОСМ ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Использовали полевые штаммы кишечной палочки, выделенные в ЭПХ СибНИИП, патогенность которых (биопроба) проверена на белых мышах и 21-дневных цыплятах в соответствии с Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных (Утв. Минсельхозом России 27.07.2000). Цыплятам контрольной интактной группы внутрибрюшинно вводили 0,5 мл физиологического раствора;

13-дневные цыплята кросса «Сибиряк 2С» – 80 цыплят, из которых 70 в возрасте 14 дней были заражены perosсмесью энтеропатогенных и условно-патогенных культур E. coli (О2, О20, О78), P. mirabilis, C. amalonaticus, C. diversus в равном соотношении в дозе 1 мл бактериальной взвеси с содержанием 1 млрд. микробных тел в 1 мл раствора по оптическому стандарту мутности (СОП №1-98). Диагностический убой проведён в 21-дневном возрасте.

Группы комплектовали методом аналогов, всего в трёх опытах использовано 300 цыплят-бройлеров, из которых 210 были экспериментально заражены в 21 день, а 70 в 14-дневном возрасте.

При наблюдении за птицей, погибшей после заражения, производили патолого-анатомическое вскрытие, взятие патматериала для гистологического исследования. После завершения опытов убой проводили декапитацией с последующим патолого-анатомическим осмотром и взятием кусочков слепых кишок (от трёх птиц из каждой группы). Материал фиксировали в 5%-ном растворе формальдегида на фосфатном буфере и по общепринятой методике обезвоживали в спиртах возрастающей крепости с последующей заливкой в парафин. Гистологические срезы толщиной 7 мкм окрашивали гематоксилином Ганзена и эозином.

Результаты исследований. При анализе гистологических препаратов слепой кишки интактных цыплят, не подвергавшихся заражению, установлено наличие индивидуальных отличий по степени морфофункциональной дифференциации слизистой оболочки, мышечная и серозная оболочки структурных отличий не имели. Наружная серозная оболочка всегда оставалась тонкой, но по периметру кишки имела неодинаковое строение. Под мезотелием находилась узкая полоска, построенная из рыхлых коротких и разных по толщине волокон соединительной ткани. Такая же рыхлая ткань находилась не только между слоями и пучками гладких миоцитов мышечной оболочки, но и в подслизистой основе слизистой оболочки. При строго поперечном сечении кишки ядра гладких миоцитов наружного слоя имели овальную и даже круглую форму, что свидетельствует об их косопродольном направлении. Артерии, вены, лимфатические сосуды и ганглии межмышечного (Мейснерова) нервного сплетения локализовались в наружном слое. Циркулярный слой в нескольких местах пересекался кровеносными сосудами. В нём пучки гладких миоцитов также имели разное направление, на что указывает различная форма их ядер – от веретеновидной до короткой овальной. Точно такая же форма ядер гладких миоцитов была и в мышечной пластинке.

Подслизистая основа слизистой оболочки хорошо заметна только возле кровеносных сосудов и ганглиев Ауэрбаховского нервного сплетения.

1res

Рис. 1. Стенка слепой кишки цыплёнка контрольной группы. 1. Основание тонкой складки. 2. Крипты. 3. Основание толстой складки. 4. Мышечная пластинка слизистой оболочки. 5. Циркулярный слой мышечной оболочки. 6. Продольный слой мышечной оболочки. 7. Лимфатические фолликулы. 8. Эпителий на складках слизистой оболочки. Объектив 10, окуляр 10.

Собственная пластинка слизистой оболочки цыплят-бройлеров данного возраста имела полиморфные складки, различавшиеся по размерам, форме, плотности стромы и наличию или отсутствию фолликулов. У всех особей соединительнотканная основа складок была плотно инфильтрирована лимфоидными клетками. Тяжи, состоящие из соединительной ткани и гладких миоцитов, обнаруживались только в тонких складках, а в толстых они не различимы из-за большого количества клеток инфильтрата (рис. 1). Редким исключением являлись те основания толстых складок, где находились обособленные лимфатические фолликулы, у которых лимфоидная ткань тонкой соединительнотканной полоской отделена от других тканей (рис. 2).

2res

Рис. 2. Лимфатические фолликулы в основании толстой складки слизистой оболочки слепой кишки цыплёнка контрольной группы. 1. Фолликулы, не отделённые соединительной тканью. 2. Фолликул окружён прослойкой соединительной ткани. Объектив 10, окуляр 10.

Лимфатические фолликулы имелись только в толстых складках, лимфоциты в них располагались плотно, но центр фолликула всегда оставался более рыхлым. Если фолликулы локализовались близко к мышечной оболочке, то в этих местах собственная пластинка слизистой оболочки не содержала крипт и была прижата к мышечной оболочке настолько близко, что подслизистая основа не просматривалась.

Кровеносные капилляры в собственной пластинке слизистой оболочки выделялись не резко из-за малого диаметра – их просветы заняты одним-двумя эритроцитами.

Вся поверхность складок и находящихся на них ворсинок была покрыта однослойным многорядным столбчатым эпителием. В криптах и на складках слизистой оболочки около трети из общего количества клеток составляли мукоциты, выделяющиеся пузыревидной формой цитоплазмы. Цитоплазма столбчатых эпителиоцитов однородна, на её фоне хорошо заметны овально-удлинённые ядра, занимающие базальную половину клетки. Высота эпителия увеличивалась в направлении к верхушкам складок, но на толстых складках она была наименьшей. Плотная щёточная каёмка хорошо заметна и прерывалась только над мукоцитами. Базальная мембрана эпителия из-за малой толщины едва заметна (рис. 3).

3res

Рис. 3. Эпителий слизистой оболочки слепой кишки цыплёнка контрольной группы. 1. Щёточная каёмка. 2. Ядра эпителиоцитов. 3. Базальная мембрана эпителия. 4. Кровеносный капилляр. 5. Мукоциты. Объектив 40, окуляр 10.

У цыплят опытной группы, выживших после заражения, патологических изменений в стенках слепых кишок не обнаружено, состояние серозной, мышечной и слизистой оболочек было таким же, как и у цыплят контрольной группы, не подвергавшихся заражению. Но в отличие от контрольной группы во всех лимфатических фолликулах плотность распределения лимфоцитов по периферии больше, чем в центре, и имелись реактивные центры. Вторым отличием являлось наличие в строме складок и в фолликулах большого количества эозинофильных лейкоцитов (рис. 4).

4res

Рис. 4. Участок слизистой оболочки слепой кишки 35-дневного цыплёнка опытной группы, выжившего после заражения. 1. Эозинофильные лейкоциты в фолликуле. 2. Эозинофильная инфильтрация перифолликулярной соединительной ткани. Объектив 100, окуляр 10.

У цыплят, погибших после заражения, патологические изменения в слизистой оболочке характерны для десквамативного катара. Эпителий сохранялся только в криптах, остальная поверхность слизистой оболочки была лишена эпителия и на ней находилась только обнажённая и утолщённая базальная мембрана. Складки и ворсинки на складках утолщены. Строма собственной пластинки слизистой оболочки разрыхлена отёчной жидкостью, диффузно и неравномерно инфильтрирована лимфоидными клетками и эозинофильными лейкоцитами. Наиболее плотные инфильтраты находились у поверхности складок, лишённой эпителия. Волокна соединительной ткани и пучки гладких миоцитов трудно различимы. Все кровеносные капилляры были переполнены кровью и чем ближе к поверхности складки, тем сильнее их наполнение. Ядра эндотелиоцитов выступали в просвет сосудов. Капилляры в верхней трети и у поверхности складок растянуты настолько, что в поперечнике их просветов помещалось до восьми эритроцитов (рис. 5).

5res

Рис. 5. Апикальная часть складки слизистой оболочки слепой кишки цыплёнка опытной группы, погибшего после заражения. 1. Базальная мембрана обнажена, сладки без эпителия. 2. Лимфоцитарный инфильтрат в отёчной строме. 3. Переполненные кровеносные капилляры. Объектив 40, окуляр 10.

6res

Рис. 6. Стенка слепой кишки цыплёнка опытной группы, погибшего после заражения. 1. Поверхность без эпителия. 2. Фолликулы. 3. Гиперемия капилляров внутри фолликула. 4. Крипты с сохранившимся эпителием. 5. Диапедезные кровоизлияния. Объектив 10, окуляр 10.

В лимфатических фолликулах реактивные центры не выделялись, плотность расположения лимфоцитов корковой зоны была неравномерной. Возле переполненных интерфолликулярных кровеносных капилляров ткань более рыхлая. В основаниях складок возле мышечной пластинки встречались диапедезные кровоизлияния (рис. 6).

Таким образом, при экспериментальном эшерихиозе цыплят-бройлеров в мышечной и серозной оболочках слепых кишок изменения гистоструктуры не обнаруживаются. Патологический процесс локализуется в собственной пластинке слизистой оболочки, в которой развивается катаральное воспаление. Альтерация проявляется в виде десквамации эпителия ворсинок и складок, а сосудистая реакция усиливается к поверхности слизистой оболочки гиперемией капилляров, кровоизлияниями в основания складок, отёком стромы с инфильтрацией лимфоидными клетками и эозинофильными лейкоцитами.

У цыплят опытной группы, погибших после заражения, десквамативный катар приводит к полному обнажению поверхности слизистой оболочки. Пролиферация эпителия и лимфоидной ткани не активируется, на что указывает рыхлое расположение лейкицитов по всему объёму фолликулов и отсутствие реактивных центров. Отсутствие пролиферации свидетельствует о недостаточной (гипоэргической) реакции организма на этиологический фактор. Отсутствие патологических изменений в стенках слепых кишок у цыплят той же группы, но выживших после заражения, подтверждает, что пролиферация эпителия обеспечила его регенерацию на всей поверхности слизистой оболочки. Указанный факт в сочетании с пролиферацией лимфоидной ткани фолликулов слизистой оболочки характерен для нормэргической защитно-приспособительной реакции организма. Инфильтрация эозинофильными лейкоцитами, сохранившаяся у цыплят этой группы, объясняется тем, что инфильтраты, в отличие от отёков, рассасываются долго, они являются следами минувшей воспалительной реакции.

Наличие реакции лимфатических фолликулов стенки слепых кишок на E.coli у цыплят, выживших после экспериментального заражения, указывает на то, что уже в этом возрасте (21-35 дней) фолликулы выполняют иммунную функцию, следовательно, их роль в патогенезе и диагностике болезней птицы бактериальной этиологии, должна учитываться.

Литература:

  1. Вракин В.Ф., Сидорова М.В. Анатомия и гистология домашней птицы. Учеб. пособие / М.: Колос, 1984. 288 с.

  2. Ибрагимов А.А. Атлас. Патоморфология и диагностика болезней птиц. М.: Колос, 2007. 120 с.

  3. Ленченко Е.М., Мансурова Е.А. Гистохимические исследования при заражении птиц токсигенными эшерихиями // Аграрная наука. 2012. № 4. С. 29-30.

  4. Лыско С.Б. Бактериальные ассоциации при респираторном микоплазмозе птиц // Птицеводство. 2004. № 5. С. 16.

  5. Меркулов Г.А. Курс патолого-гистологической техники. Л.: Медицина, 1969. 432 с.

  6. Турицина Е.Г. Критерии оценки иммунодефицитов птиц // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2009. № 5. С. 73-77.

  7. Шестаков В.А. Гистологическое строение толстого кишечника цыплят / Макро-микроморфология и гистохимия сельскохозяйственных животных в сравнительно-видовом и возрастном аспектах: Науч. тр. Омск. 1987. С.69-74.

  8. Ветеринарная. Энциклопедия. Гл. ред. К. И. Скрябин. М.: Советская Энциклопедия, 1969. Т. 2. С. 153-154. (Энциклопедии. Словари. Справочники).